细胞培养开始前的准备工作

发表日期: 2017-09-11    浏览数: 3435

细胞培养开始前的准备工作

一、掌握相关知识:

1.学习细胞培养知识。

了解相关概念、方法,记住操作过程,观摩、参与实际操作。参考书《动物细胞培养-基本技术指南》(科学出版社)。

2.掌握无菌技术。

高压消毒实验用品:操作台上不是一次性的物品均需做灭菌处理,无法高压的物品应使用75%酒精消毒。

消毒操作间和操作台:使用75%酒精擦拭无菌间的墙面、地面,操作台的台面,孵箱,离心机等。操作前须用紫外线照射无菌间和操作台30分钟消毒。入无菌间须穿隔离服,戴手套、口罩、帽子。用75%酒精洗去手套上的滑石粉。

无菌操作:操作时应尽量接近酒精灯;拿取吸管时,避免接触其使用端;不要在开口器皿的上方操作;吸取不同液体应更换吸管。不能碰瓶口。万一碰到,更换吸管。

 

二、细胞引进/订购:

1.根据实验目的和要求选择实验细胞:细胞培养已广泛应用于各个生物学、医学实验室及治疗和生产上。应根据自身实验的特性、要求,充分文献学习,了解细胞的特性,选择可以使用的细胞范围。并与导师沟通后,决定所需细胞。充分了解目前对实验用细胞质量的要求。

2.预定细胞:登陆国家细胞资源平台网站(http://cellresource.cn)或电话咨询细胞中心(协和细胞资源中心细胞服务联系电话010-65296455、65286441),详细了解细胞的详细情况,如培养基种类、代次、价格等。预定细胞时间一般为实验前的1-2周。需提供细胞名称(英文缩写)、订购人的姓名、电话、单位、email。

三、细胞培养用品的准备:

1无菌服装:包括消毒隔离服(有条件的实验室)或专用工作服(如白大褂)、无菌手套、无菌帽和口罩。除隔离服外,其他物品最好为一次性使用。

2.操作台:有条件的实验室可装备超净培养间,超净工作台和生物安全柜也可。所有物品除一次性物品外均需高压灭菌。有酒精灯及95%酒精、吸管或枪(枪头)、洗耳球、或电动移液器、小试管及试管架、培养瓶架、离心管、培养皿或培养瓶、计数板、废液缸。

3.仪器设备:相差显微镜、离心机、冰箱、水浴锅、无菌车及架子、废物桶、marker笔、灭菌擦手纸、75%酒精喷壶。

4.培养用液:PBS或D-hanks、胰酶等消化液(一般为0.05%或0.25%)、培养基(常用的有DMEM、R1640、MEN-EBSS、MEN-NEAA、F12、L15等)、血清(胎牛、小牛、马等)、生长因子、药物。培养用液需提前向公司订购,或咨询协和细胞资源中心制剂服务联系电话(010-65296983、65212041)。这些培养用液都有商业供应,不建议购买粉剂自己制备液体。

5.其他实验相关用品。一些非常规特殊用途的添加成分或实验用品,须向公司订购,因寄送有一定滞后性,建议在订细胞之前购买。